多聚甲醛期貨價格

❶ 4%多聚甲醛固定爬片上的細胞具體步驟是怎樣的呢

細胞爬片就是讓玻片浸在細胞培養基內，細胞在玻片上生長。主要用於組織學，免疫組織化學，冰凍切片，細胞塗片，原位雜交等。

細胞爬片的准備

1蓋玻片的選擇：

爬片可用一般的蓋玻片，也可用專用細胞爬片（價格比較昂貴）但是細胞貼壁牢固，拍出照片效果好；

2爬片的剪裁：

可根據自己的需要，到染色時再將之切開，這樣既保證了細胞均一性，又可同時做幾個指標的染色剪裁成合適大小，置於6孔板、12孔板或24孔板；

3爬片的使用前處理：

將剪裁好的爬片，置於濃硫酸中浸泡並過夜，第二天先用自來水沖洗20遍，再置於無水酒清中浸泡6小時，再用三蒸水沖洗3遍（個人認為主要目的是將酸沖洗干凈就可以了，如果不幹凈的話，細胞帖壁不好），放在飯盒或者玻璃培養皿中烘乾後進行高壓消毒。高壓後取出放入烤箱中烤乾，備用。烤乾後可放入超凈台中。

4多聚賴氨酸的使用：

很多人都將玻片用此處理，以使細胞與玻片結合更牢。但我在做爬片時從來沒用過多聚賴氨酸，細胞貼壁仍然很好，且在做後續的免疫細胞化學染色、TUNEL等凋亡檢測、免疫熒光等也從未脫過片。

細胞爬片的操作

1.胰酶消化細胞後計數重懸細胞於完全培養基中。

2.加細胞前，根據玻片的大小，先在每個孔里准備放爬片的位置滴少量培養基，使玻片與培養皿靠培養基的張力粘合到一起，然後放玻片，防止加細胞懸液時玻片漂起，造成雙層細胞貼片。(整個過程注意無菌操作)

3.根據自己的需要選擇合適的細胞密度接入培養板內即可。

4.待細胞貼壁後，可去上清加含葯培養基。

5.按照實驗設計，作用一定時間後取玻片。取玻片時由於玻片與培養皿底結合較緊，張力較大，一般將注射器針頭針尖向背面弄個小鉤，這樣將爬片輕輕勾起，用小鑷子取出就可以了。如果要做諸如24h，48h，72h等這樣時間點的實驗的話，將所需數量的爬片取出時應用酒精燈火焰燒一下針頭和鑷子。末取出的可接著繼續培養。

細胞爬片的固定

另外在保存細胞爬片的時候，一般用培養皿或板，先在皿底放一層面巾紙，然後再放爬片，這樣方便做實驗時取片。

細胞爬片取出後，一般用PBS洗2遍，然後再做固定。當然，有例外，比如做凋亡的TUNEL染色時就避免洗，因為凋亡的細胞在洗的過程中有可能會脫落。

然後蓋上蓋子，並在蓋子上做標記，為避免混淆，可用透明膠帶將蓋子和皿連在一起。一般-20℃保存2-3個月的片子做免疫組化是沒有問題的。

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